Съдържание
- Какво е генотип и фенотип?
- Обяснение на генотипирането на ХИВ
- Обяснение на фенотипирането на ХИВ
- Кога се провежда тест за генетична устойчивост?
Когато настъпи неуспех в лечението, трябва да се изберат алтернативни лекарствени комбинации, за да се потисне тази нова популация на резистентен вирус. Тестване на генетична устойчивост спомага за улесняването на това, като идентифицира видовете устойчиви мутации във „вирусния пул“ на човек, като същевременно установява доколко податливи са тези вируси към възможните антиретровирусни агенти.
За тестване на генетична резистентност при ХИВ се използват два основни инструмента: Генотипно изследване за ХИВ и Фенотипно изследване за ХИВ.
Какво е генотип и фенотип?
По дефиниция генотипът е просто генетичен състав на организма, докато фенотипът е наблюдаваните характеристики или черти на този организъм.
Генотипните анализи (или генотипизиране) функционират чрез идентифициране на наследените инструкции в рамките на генетичното кодиране на клетката или ДНК. Фенотипните анализи (или фенотипизиране) потвърждават изразяването на тези инструкции под въздействието на различни условия на околната среда.
Въпреки че връзката между генотипа и фенотипа не е абсолютна, генотипирането често може да бъде предсказващо за фенотип, особено когато промените в генетичния код придават очаквани промени в чертите или характеристиките - както в случая на развитие на лекарствена резистентност.
Фенотипизирането, от друга страна, потвърждава „тук и сега“. Той има за цел да оцени реакцията на организма към специфични промени в налягането в околната среда, например когато ХИВ е изложен на различни лекарства и / или концентрации на лекарства.
Обяснение на генотипирането на ХИВ
Генотипирането на ХИВ обикновено е най-често използваната технология, използвана за тестване на резистентност. Целта на анализа е да се открият специфични генетични мутации в gag-pol регион на вируса " геном (или генетичен код). Това е регионът, където ензимите на обратна транскриптаза, протеаза и интеграза - целите на повечето антиретровирусни лекарства - са кодирани върху ДНК веригата.
Чрез първо усилване на генома на HIV с помощта на технология на полимеразна верижна реакция (PCR), лаборантите могат да секвенират (или „картографират“) генетиката на вируса, използвайки различни технологии за откриване на мутации.
Тези мутации (или натрупване на мутации) се интерпретират от техници, които анализират връзката между идентифицираните мутации и очакваната чувствителност на вируса към различни антиретровирусни лекарства. Онлайн базите данни могат да помогнат чрез сравняване на тестовата последователност с тази на прототип на "див тип" вирус (т.е. ХИВ, който не съдържа устойчиви мутации).
Тълкуването на тези тестове се използва за определяне на чувствителността към лекарства, като по-големият брой ключови мутации дават по-високи нива на лекарствена резистентност.
Обяснение на фенотипирането на ХИВ
Фенотипирането на ХИВ оценява растежа на ХИВ на човек в присъствието на лекарство, след което сравнява това с растежа на контролен вирус от див тип в същото лекарство.
Както при генотипните анализи, фенотипните тестове усилват gag-pol региона на ХИВ генома. След това този раздел от генетичния код се „присажда“ върху клонинг от див тип технология на рекомбинантна ДНК. Полученият рекомбинантен вирус се използва за заразяване на клетки на бозайници in vitro (в лабораторията).
След това вирусната проба се излага на нарастващи концентрации на различни антиретровирусни лекарства, докато се постигне 50% и 90% вирусна супресия. След това концентрациите се сравняват с резултатите от контролната проба от див тип.
Относителните „гънкави“ промени осигуряват диапазона на стойностите, чрез който се определя чувствителността към лекарството. Четирикратна промяна просто означава, че е необходимо четирикратно количество лекарство за постигане на вирусна супресия в сравнение с тази от дивия тип. Колкото по-голяма е стойността на сгъване, толкова по-малко чувствителен е вирусът към конкретно лекарство.
След това тези стойности се поставят в по-ниски клинични и горни клинични граници, като горните стойности дават по-високи нива на лекарствена резистентност.
Кога се провежда тест за генетична устойчивост?
В САЩ традиционно се провеждат тестове за генетична резистентност върху пациенти, които не са лекувани, за да се определи дали те имат някаква "придобита" лекарствена резистентност. Изследвания в САЩ предполагат, че между 6% и 16% от предадения вирус ще са устойчиви на поне едно антиретровирусно лекарство, докато близо 5% ще бъдат устойчиви на повече от един клас лекарства.
Тестовете за генетична резистентност се използват и при съмнения за лекарствена резистентност при лица на терапия. Тестването се извършва, докато пациентът или приема неуспешен режим, или в рамките на четири седмици след прекратяване на лечението, ако вирусният товар е по-голям от 500 копия / ml. Генотипичните тестове обикновено се предпочитат в тези случаи, тъй като струват по-малко, имат по-бързо време за изпълнение и предлагат по-голяма чувствителност за откриване на смеси от див тип и резистентен вирус.
Комбинацията от фенотипични и генотипични тестове обикновено се предпочита за лица със сложна резистентност към много лекарства, особено за тези, изложени на протеазни инхибитори.